ISH-思特進(jìn)

在選擇探針類型的同時(shí)，還需要選擇標(biāo)記方法。探針的標(biāo)記方法很多，選擇什么標(biāo)記方法主要視個(gè)人的習(xí)慣和可利用條件而定。但在選擇標(biāo)記方法時(shí)，還應(yīng)考慮實(shí)驗(yàn)的要求，ish，如靈敏度和顯示方法等。一般認(rèn)為放0射性探針比非放0射性探針的靈敏度高。放0射性探針的實(shí)際靈敏度不依賴于所采用的標(biāo)記方法，如隨機(jī)引物延伸法往往得到比缺口平移法更高的比活性 。在檢測(cè)單拷貝*序列時(shí)，應(yīng)選用標(biāo)記效0率0高、顯示靈敏的探針標(biāo)記方法。在對(duì)靈敏要求不高時(shí)，可采用保存時(shí)間長(zhǎng)的生物素探針技術(shù)和比較穩(wěn)定的堿性*酶顯示系統(tǒng)。
原位雜交技術(shù)應(yīng)用于染色體、細(xì)胞和組織切片等樣品中進(jìn)行核酸特異性檢測(cè)，與免6疫組化技術(shù)的結(jié)合應(yīng)用，能將dna、mrna和蛋白水平上的*活性與樣品的顯微拓?fù)湫畔⒔Y(jié)合起來(lái)。1969年pardue和gall將放9射性標(biāo)記的探針直接應(yīng)用于純化核酸的雜交，此后得益于分子克6隆技術(shù)的發(fā)展，及不同探針標(biāo)記系統(tǒng)和檢測(cè)系統(tǒng)的應(yīng)用，大大增加了原位雜交檢測(cè)的應(yīng)用靈活性和檢測(cè)靈敏度。
使用分支dna信號(hào)擴(kuò)增的rna fish
invitrogen? viewrna?和primeflow?檢測(cè)是使用分支dna信號(hào)擴(kuò)增 (bdna) 來(lái)檢測(cè)特異性信號(hào)的直接熒光rna ish方法。 使用*但兼容的信號(hào)擴(kuò)增系統(tǒng)讓rna靶標(biāo)的多重復(fù)用成為可能。 熒光rna原位雜交檢測(cè)分為四個(gè)主要步驟：樣本制備、靶標(biāo)雜交、信號(hào)擴(kuò)增以及檢測(cè)。 該方法可實(shí)現(xiàn)更高的特異性，更低的背景值和更高的信噪比。
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