Taq酶-武漢友名生物公司(圖)

隨機引物擴增技術(shù)(arbitrary primedpcr， ap- pcr)
ap-pcr技術(shù)通過隨意設(shè)計或選擇一個非特異性引物.在pcr反應(yīng)體系中.首先在不嚴(yán)格條件下使引物與模板中許多序列通過錯配而復(fù)性。如果在兩條單鏈上相距一定距離有反向復(fù)性引物存在，則可經(jīng)taq酶的作用使引物延伸而發(fā)生dna部分片段的擴增。經(jīng)一至數(shù)輪不嚴(yán)格條件下的pcr循環(huán)后，再于嚴(yán)格條件下進(jìn)行擴增。擴增的產(chǎn)物經(jīng)dna測序凝膠電泳分離后.經(jīng)放1射性自顯影或熒光顯示即可得到dna*圖。ap-pcr用于腫1瘤的**、**的分離;菌1種、菌株及不同物種的鑒定;遺傳作圖;不同分化程度或某些不同狀態(tài)下的組織的*表達(dá)差異等方面的研究。
pcr反應(yīng)特異性強：pcr反應(yīng)的特異性決定因素為：①引物與模板dna特異正確的結(jié)合；②堿基配對原則；③taq dna聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；④靶*的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及taqdna聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合（復(fù)性）可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶*片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶*區(qū)，其特異性程度就更高。
*分型
pcr可用于檢測特定細(xì)胞或生物體中等位*的序列差異。例如，taq酶，*敲除和敲入小鼠等生物的*分型[3]。引物對經(jīng)設(shè)計位于目標(biāo)區(qū)域側(cè)翼，可根據(jù)是否存在擴增子及擴增子長度來檢測遺傳變異。
但是如果為了檢測特定核苷酸突變，則必須對擴增的序列進(jìn)行進(jìn)一步分析。例如， pcr擴增子測序就是研究單核苷酸變異（snvs）和單核苷酸多態(tài)性（snp）的方法之一。強烈推薦使用高保真dna聚合酶，以防止在pcr過程中引入多余的突變。
通過pcr進(jìn)行*分型也是對*1癥和遺傳病中的突變進(jìn)行遺傳分析的一個基本方式。
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