TwistDx公司重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)（RPA）

twistdx 的重組酶聚合酶擴(kuò)增（rpa）將徹底改變在資源有限的現(xiàn)場環(huán)境中擴(kuò)增和檢測核酸的能力。rpa 技術(shù)原理rpa 體系的重點(diǎn)是重組酶，這些酶與寡核苷酸引物形成復(fù)合體，并使引物與雙鏈 dna 中的同源序列配對。單鏈 dna 結(jié)合（ssb）蛋白與被取代的 dna 鏈結(jié)合，并使形成的 d 環(huán)保持穩(wěn)定。然后從引物啟動由聚合酶介導(dǎo)的 dna 擴(kuò)增，但前提是存在靶標(biāo)序列。一旦啟動，擴(kuò)增反應(yīng)將快速進(jìn)行，因此開始時只需一點(diǎn)靶標(biāo) dna 拷貝數(shù)，高特異性 dna 擴(kuò)增在數(shù)分鐘內(nèi)即可達(dá)到可檢出水平。rpa 循環(huán)
rpa 的技術(shù)特點(diǎn)為什么選擇 rpa 方法?◇ 速度rpa 非?？焖?，在 37～42 °c 這一通常較適宜的反應(yīng)溫度下，只需少量核酸分子即可在 3～10 分鐘（通常）內(nèi)擴(kuò)增至可檢出水平，但這將取決于靶標(biāo)大小。在大部分情況下，只需要一個人即可在半小時內(nèi)采集樣本、制備樣本、運(yùn)行檢測并**結(jié)果，并且*專業(yè)培訓(xùn)?！?靈敏度rpa 可檢測復(fù)合樣本中的單拷貝 dna 和 10 拷貝甚至較少 rna，而*預(yù)先純化核酸。◇ 特異性rpa 具有高度特異性，該技術(shù)可從可能含有數(shù)百納克來自多個不同物種的不相關(guān)復(fù)合基因組 dna（包括人 dna）的樣本中識別并擴(kuò)增單個 dna 分子，抗干擾能力強(qiáng)?！蠛銣剡\(yùn)行rpa 在恒定的低溫（37～42 °c 較適宜）下運(yùn)行。對于某些應(yīng)用，如果需要，即便體溫也可支持 rpa 擴(kuò)增。該反應(yīng)在偏離溫度及低溫設(shè)置下也表現(xiàn)穩(wěn)健，即使在常規(guī)室溫 25 °c 下也將奏效，雖然反應(yīng)速度會下降; 在此溫度下，只要此生物化學(xué)過程被正確配置，仍可在一小時內(nèi)獲得結(jié)果?！?樣本容差rpa 對樣本類型的要求寬松，有時可直接檢測未經(jīng)核酸純化的原始樣本，例如血液、鼻拭子或培養(yǎng)基。通常，只需采用基本的病原體裂解方法處理樣本以釋放核酸即可，例如熱處理或弱堿處理。每種檢測所需的較合適的樣本制備方法取決于病原體滴定度、是否存在抑制劑以及裂解要求等因素，并將需要設(shè)計到檢測程序中。rpa 對某些復(fù)合樣本類型的寬容性使該技術(shù)非常適合廣泛的現(xiàn)場實(shí)地應(yīng)用?！?廣泛的適用性rpa 能夠方便地應(yīng)用于任何 dna 或 rna 靶標(biāo)，無序列偏好性，這一點(diǎn)對于 ngs 尤其重要。如果將逆轉(zhuǎn)錄酶添加到反應(yīng)混合液中開發(fā)出了**高靈敏度的 rna 一步檢測法?！?多重檢測通過將多種引物同時添加到同一反應(yīng)管中，單次 rpa 測試即可擴(kuò)增和檢測多種不同的靶標(biāo)?！?低設(shè)備成本rpa 僅需要基本的檢測設(shè)備，也就是說，較終用戶可以使用 rpa 技術(shù)開發(fā)出適合各種應(yīng)用和環(huán)境的人性化診斷方法和試劑盒?！?靈活的試劑形態(tài)**反應(yīng)組分能夠以穩(wěn)定的干燥形態(tài)供貨，該形態(tài)易于運(yùn)輸，且*冷藏即可儲存較多 12 個月（穩(wěn)定性可能因用途不同而有變化，因此仍建議在冷藏條件下長期儲存），也能夠以pcr試劑較常見的液體形態(tài)供貨，該形態(tài)允許用戶針對特定的應(yīng)用改變反應(yīng)體積和組分比例?！?多種檢測形式rpa 可應(yīng)用于各種檢測系統(tǒng)和儀器，包括實(shí)時熒光探針和夾心法等形式。
rpa 與 其他核酸擴(kuò)增方法 pcr 及 lamp 的比較
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